[tel-01077756] Fluorescence picoseconde de complexes bio-moléculaires hors équilibre dans un écoulement microfluidique

This thesis has proven the feasibility of measuring the relaxation of a biomolecular complex as well as its structural heterogeneity by associating microfluidics and time resolved fluorescence TRF I present in which way TRF allows for probing the structure of a molecule and how it is measured in particular by using a streak camera I then introduce droplet microfluidics which enables to mix two reagents in a few milliseconds and to follow the relaxation of the complex along propagation of the micro-reactors Next the measurement of a kinetics with test molecules validates the proof of concept reported in a submitted article Finally the measurement of TRF by single photon counting in single droplets is described It opens a perspective for an application in high-throughput screening a patent has been registeredCe travail de thèse a démontré la possibilité de mesurer la relaxation d’un complexe biomoléculaire ainsi que son hétérogénéité structurale en associant la microfluidique et la fluorescence résolue en temps FRT Je présente de quelle façon la FRT permet d’obtenir une information sur la structure d’une molécule et comment on la mesure notamment grâce à une caméra à balayage de fente J’introduis ensuite la microfluidique de gouttes permettant de mélanger deux réactifs en quelques millisecondes et de suivre la relaxation du complexe au cours de la propagation des micro-réacteurs Puis la mesure d’une cinétique avec un couple de molécules modèle démontre la preuve de principe faisant l’objet d’un article soumis Enfin la mesure de FRT par comptage de photons uniques dans des gouttes uniques est décrite Elle ouvre une perspective d’application pour le criblage à haut débit un brevet a été déposé



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